엔도톡신 기기의 조건과 설정값

안녕하세요 에마리 입니다.

 

오늘은 엔도톡신 기기의 조건과 설정값의 의미에 대해 알아보겠습니다.

 

엔도톡신 기기는 엔도톡신을 측정하는 기기인데 겔화법은 37도의 온도만 유지해주면 되서 Heating block이라는 비교적 단순한 기기로 하게 됩니다.

Heating block

검액이 튜브 안에 있고 그 튜브의 온도 조건을 일정온도(37±1°C)를 일정시간동안 유지하기 위한 기기입니다.

 

하지만 광학적 방법은 상대적으로 복잡한 개념과 원리로 측정이 되는데요 

 

그래서 Heating block 보다는 좀 복잡한 기기가 필요합니다.

 

여러업체에서 해당 기기를 만들지만 일반적으로 Charles river의 Microplate reader기를 사용합니다.

엔도톡신 측정기

검액을 96 well plate에 분주 하고 LAL reagent를 넣어서 반응을 시키는데요

 

비탁법, 비색법 모두 종말점, 속도론적 방법이 있는데 

 

종말점은 일정시간 후 흡광도 값을 측정하여 엔도톡신 값을 측정하는것이고 속도론적은 특정 흡광도 값에 도달하는 시간을 측정하여 엔도톡신 값을 측정하는 것입니다.

 

여기서는 속도론적 비탁법(kinetic turbidimetric method)을 중심으로 말씀드리겠습니다. 

 

여기서 필요한 조건은

 

1) 온도

2) On set OD(흡광도 값)

3) 측정파장

 

이렇게 세가지 조건이 필요합니다.

 

온도는 37±1°C에서 반응을 진행시키며

 

On set OD 값은 특정값을 설정하게 되는데 그 특정 값에 도달하기까지 시간을 설정하는 것입니다.

 

보통 0.05 OD 값을 설정하는데 0.05에 도달하는 시간으로 엔도톡신 값을 나타냅니다.

 

측정파장은 흡광도를 측정할때 물질마다 빛의 파장을 모두 흡수하는것이 아니고 가장 잘 흡수하는 파장이 따로 정해져 있습니다.

 

예를 들면 DNA를 분석할때는 흡광도를 260nm에서 가장 잘 흡수하고 물은 970 – 980 nm 파장의 빛을 가장 많이 흡수합니다. 그래서 단순 빛의 흡광도로 시료를 분석하면 한계가 있고 원하는 물질의 최적흡수파장으로 실험을 해야 비교적 정확한 결과를 얻을 수 있습니다.

 

그래서 엔도톡신에서 비탁법을 시험하기 위해서는 340nm의 파장을 이용하여 분석하고 비색법을 이용해서 분석하기 위해서는 405nm의 파장을 이용해서 시험을 하게 됩니다.

 

이 조건으로 시험하면서 우리는 검체내 엔도톡신 양을 정량적으로 분석할 수 있게 됩니다.